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酶联免疫吸附法(ELISA)试验小常识
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酶联免疫吸附法(ELISA)试验小常识

  • 分类:相关知识
  • 作者:
  • 发布时间:2012-01-05 14:35:00

酶联免疫吸附法(ELISA)试验小常识

  • 分类:相关知识
  • 作者:
  • 来源:
  • 发布时间:2012-01-05 14:35
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一、平衡:
  操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。

  二、加样:
  1、标本为血清:最好将血液先自然存放l-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;
  2、标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rmp离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内;
  3、加样后及时放入孵箱,加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干;
  4、定期校验移液器,移液器与枪头要配套,移液不宜太快,排放要完全,枪头最好一次性使用;
  5、标本较多时,应分批操作。

  三、孵育:
  1、贴封片或加盖;
  2、用定时钟准确计时;
  3、定期校验恒温箱;
  4、在振荡器上充分混匀再放入恒温箱。

  四、洗板:
  1、保证洗液注满各孔,但不要溢出,洗板针畅通,洗完板后最好在吸水纸(选择干净,无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
  2、合理安排,或多用几台洗板机;
  3、配洗液应使用纯净的蒸馏水,并防止被污染。

  五、显色:
  1、显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用;
  2、加样时保持显色剂不外流。

  六、终止:
  加终止液时应避免产成气泡。

  七、读板:
  1、清洁酶标板;
  2、定期校验酶标仪,TMB显色使用450nm波长。

  八、全过程:
  1、尽量使用移液器加液,如用滴瓶应保证滴瓶垂直向下,持力均匀,滴速不宜过快,每孔一滴;
  2、孵育的时间和温度应严格控制,严格按说明书操作;
  3、不同批号、不同品种的试剂组份不能交叉使用;
  4、试剂盒应在4~8℃储存,不要长时间置于常温下或反复冻融,用剩的试剂应把瓶子盖好,板条放在密实袋内,保存在合适的环境中,尽快用完。

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